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細胞培養(yǎng):一般細胞處理

發(fā)布時間: 2023-12-08  點擊次數(shù): 636次

 

處理培養(yǎng)細胞

從 19 世紀末開始,科學家們就從各種生物體(例如人類、小鼠、豬、雞和植物)中分離出自然環(huán)境中的細胞,并將它們置于體外(拉丁語“玻璃中")中。 ) 文化。實驗細胞是從許多不同的組織和器官中提取的,例如腸、腎、血液、腦、乳腺和許多癌癥實體。

體外培養(yǎng)細胞的目的是模擬培養(yǎng)箱內(nèi)的體內(nèi)(拉丁語“活體中")條件,或者在進行活細胞成像時甚至在顯微鏡下模擬體內(nèi)條件。每種細胞類型都需要定制培養(yǎng)參數(shù),以實現(xiàn)最佳的健康、活力和生長。對于所有實驗,保持條件無菌、均質(zhì)和可重復至關重要,以獲得可比較的結果。

傳代、接種和冷凍細胞

為了保持細胞處于增殖狀態(tài),并防止它們達到過度匯合,以規(guī)定的時間間隔進行傳代非常重要。必須定期進行細胞傳代,以保持細胞處于培養(yǎng)狀態(tài)、實現(xiàn)體積放大或在實驗開始時接種它們。該過程也稱為細胞分裂或傳代培養(yǎng)。除其他因素外,傳代的最佳時間取決于增殖率以及所需的細胞數(shù)量。每種細胞類型的確切裂解方案都是b的。一般來說,貼壁細胞使用蛋白水解酶(主要是胰蛋白酶/EDTA)從基質(zhì)上分離,這對于消化其蛋白質(zhì)附著鍵是必需的。接下來,將細胞勻漿、計數(shù)并接種到新容器中,從而將傳代次數(shù)增加一倍。

傳代/傳代=將細胞轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)皿和生長培養(yǎng)基中

一些細胞系,例如 HeLa 或其他缺乏細胞周期調(diào)節(jié)的癌細胞,可以無限傳代而不喪失分裂能力(永生細胞系)。此外,某些胚胎細胞類型或多能干細胞也是如此。其他細胞,特別是原代細胞(例如,從成體器官中分離的細胞),在幾次傳代后將失去這種能力,因為它們要么經(jīng)歷衰老,要么分化,要么死亡。因此,使用具有相似傳代數(shù)的細胞進行可重復的實驗非常重要。

對于細胞接種,需要選擇適合各自細胞類型、細胞培養(yǎng)容器和實驗裝置的密度。如果密度太低,細胞可能會由于生長因子釋放到培養(yǎng)基中不足而停止生長。缺乏細胞間和細胞間基質(zhì)通訊的單個細胞甚至可能因一種特殊形式的程序性細胞死亡(稱為失巢凋亡)而死亡。如果接種密度太高,細胞可能在很短的時間內(nèi)就已經(jīng)達到過度匯合。這會導致增殖受損和細胞與基質(zhì)分離,從而導致實驗條件不可重復。

標準細胞類型可在 –80°C 下短期保存,或在液氮中長期保存。為此,需要對細胞進行胰蛋白酶化、均質(zhì)化和離心,然后使用特殊的冷凍介質(zhì)進行冷凍。為了對抗此過程引起的細胞應激,建議使用具有高回收率的冷凍介質(zhì)。此外,解凍過程必須快速進行(例如,在37°C的水浴中),然后將細胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中并將其放入培養(yǎng)箱中以創(chuàng)造生理條件。


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